Memeli oositlerinde, mayoz bölünme erken embriyonik dönemde başlamasına rağmen, GV aşaması olarak da adlandırılan profaz I'den öteye gidemez. Oosit maturasyonu, oositin, hipofiz bezinden gelen LH dalgası ile mayoza devam etmesi olarak adlandırılabilir. Nitrik oksitin (NO), fare oosit maturasyonunda nasıl bir rol oynadığı halen tamamıyla aydınlatılmış değildir. Biz de çalısmamızda NO'nun maturasyondaki rolünün halkasal nükleotid fosfodiesterazlarla (PDE) ilgisi olup olmadığını araştırmayı amaçladık. Bunun için, 21-28 günlük farelerden topladığımız oositleri, hücre içi PDE aktivitesini doğrudan veya dolaylı olarak etkileyen farklı ajanlar içeren medyumlarda, aynı kültür sartlarında kültüre ettik. NO üreten NOS enzimini bloke etmek için 1 mM L-NAME (LN) kullandık. Oositteki hakim PDE izoformu PDE3A'yı baskılamak için 4 mM konsantrasyonda hipoksantin (HX) kullanıldı. Üçüncü bir deney grubu olarak HX ve LN içeren medyumların birebir orandaki karısımı kullanıldı (HX+LN). Kontrol grubuna ise hiçbir kimyasal eklenmedi. COC'lar 2, 4, 6, 8, 10, 20 ve 24. saatlerde incelenerek maturasyon aşamaları açısından değerlendirildi. Deneyler sonucunda kontrol grubu en yüksek maturasyon oranını elde ederken, hipoksantin eklenen gruptaki oositler 24 saatin sonunda bile çok düşük oranda maturasyon gerçekleştirerek GV aşamasında kalmıştır. LN grubunda maturasyon, 8. saate kadar, kontrol grubu ile benzer şekilde yüksek oranlarda gerçekleşmiş ancak oositlerde meydana gelen dejenerasyon nedeniyle 24 saatin sonunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede düşük oranda kalmıştır. HX+LN grubunda maturasyon ilk 6 saatte başlamazken deney sonunda LN grubunun değerlerine ulaştı. HX+LN grubunda, deneyin ilk altı saatinde HX grubundaki gibi sıfır olan maturasyon değerlerinin, deneyin ilerleyen saatlerinde L-NAME etkisiyle yükselmesi; fare oositlerinde, hücre içinde sentezlenen NO'nun, cGMP aracılığıyla PDE3A üzerinden maturasyonu geciktirdiğini ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler : Oosit maturasyonu, Oosit kültürü, Nitrik Oksit (NO), Nitrik Oksit sentaz, (NOS), halkasal nükleotid fosfodiesteraz (PDE)
In mammalian oocytes, meiosis starts at the early embryonic period but becomes arrested at the prophase I stage which is also termed the GV stage. Oocyte maturation can be termed as the reinitiation of the meiosis fallowing LH surge from the pituitary gland. The role of Nitric oxide (NO) on mouse oocyte maturation is not clarified yet. We aimed to investigate the role of NO if it's related with the cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs) or not. Oocytes isolated from 21-28 days old mice and cultured in the same culture conditions with different agents which manipulate activity of PDE directly or indirectly. L-NAME (1 mM) was used to inhibit, NO producing enzyme, NOS. Hypoxanthine (HX) (4 mM) is used to inhibit PDE3A, dominant PDE form of the oocyte. A third group consisted of the 1:1 mixture of fist two medium (HX+LN). No additives used in control group. Oocytes were examined at 2, 4, 6, 8, 10, 20 and 24th hours for the maturation stage. Oocytes in HX medium showed very low maturation rates and stayed at GV stage at the end of the 24 hour while control oocytes reached maximum maturation rates. LN group oocytes maturated like the control group until 8th hour but total maturation rate remained significantly low at the end of the experiment because of the high degeneration rates. Maturation didn't start at the HX+LN group for first six hour but reached the LN group at 24th hour. The increase of maturation rates at the HX+LN group with the effect of L-NAME after the sixth hour of the experiment which is zero before, showed that; intracellulary synthesized NO delays mouse oocyte maturation via inhibiting PDE3A with cGMP. Keywords : Oocyte maturation, Oocyte culture, Nitric Oxide (NO), Nitric Oxide Synthase (NOS), cyclic nucleotide phosphodiesterase (PDE).
Tez (Yüksek Lisans) - Süleyman Demirel Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, 2007.
Kaynakça var.
Memeli oositlerinde, mayoz bölünme erken embriyonik dönemde başlamasına rağmen, GV aşaması olarak da adlandırılan profaz I'den öteye gidemez. Oosit maturasyonu, oositin, hipofiz bezinden gelen LH dalgası ile mayoza devam etmesi olarak adlandırılabilir. Nitrik oksitin (NO), fare oosit maturasyonunda nasıl bir rol oynadığı halen tamamıyla aydınlatılmış değildir. Biz de çalısmamızda NO'nun maturasyondaki rolünün halkasal nükleotid fosfodiesterazlarla (PDE) ilgisi olup olmadığını araştırmayı amaçladık. Bunun için, 21-28 günlük farelerden topladığımız oositleri, hücre içi PDE aktivitesini doğrudan veya dolaylı olarak etkileyen farklı ajanlar içeren medyumlarda, aynı kültür sartlarında kültüre ettik. NO üreten NOS enzimini bloke etmek için 1 mM L-NAME (LN) kullandık. Oositteki hakim PDE izoformu PDE3A'yı baskılamak için 4 mM konsantrasyonda hipoksantin (HX) kullanıldı. Üçüncü bir deney grubu olarak HX ve LN içeren medyumların birebir orandaki karısımı kullanıldı (HX+LN). Kontrol grubuna ise hiçbir kimyasal eklenmedi. COC'lar 2, 4, 6, 8, 10, 20 ve 24. saatlerde incelenerek maturasyon aşamaları açısından değerlendirildi. Deneyler sonucunda kontrol grubu en yüksek maturasyon oranını elde ederken, hipoksantin eklenen gruptaki oositler 24 saatin sonunda bile çok düşük oranda maturasyon gerçekleştirerek GV aşamasında kalmıştır. LN grubunda maturasyon, 8. saate kadar, kontrol grubu ile benzer şekilde yüksek oranlarda gerçekleşmiş ancak oositlerde meydana gelen dejenerasyon nedeniyle 24 saatin sonunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede düşük oranda kalmıştır. HX+LN grubunda maturasyon ilk 6 saatte başlamazken deney sonunda LN grubunun değerlerine ulaştı. HX+LN grubunda, deneyin ilk altı saatinde HX grubundaki gibi sıfır olan maturasyon değerlerinin, deneyin ilerleyen saatlerinde L-NAME etkisiyle yükselmesi; fare oositlerinde, hücre içinde sentezlenen NO'nun, cGMP aracılığıyla PDE3A üzerinden maturasyonu geciktirdiğini ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler : Oosit maturasyonu, Oosit kültürü, Nitrik Oksit (NO), Nitrik Oksit sentaz, (NOS), halkasal nükleotid fosfodiesteraz (PDE)
In mammalian oocytes, meiosis starts at the early embryonic period but becomes arrested at the prophase I stage which is also termed the GV stage. Oocyte maturation can be termed as the reinitiation of the meiosis fallowing LH surge from the pituitary gland. The role of Nitric oxide (NO) on mouse oocyte maturation is not clarified yet. We aimed to investigate the role of NO if it's related with the cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs) or not. Oocytes isolated from 21-28 days old mice and cultured in the same culture conditions with different agents which manipulate activity of PDE directly or indirectly. L-NAME (1 mM) was used to inhibit, NO producing enzyme, NOS. Hypoxanthine (HX) (4 mM) is used to inhibit PDE3A, dominant PDE form of the oocyte. A third group consisted of the 1:1 mixture of fist two medium (HX+LN). No additives used in control group. Oocytes were examined at 2, 4, 6, 8, 10, 20 and 24th hours for the maturation stage. Oocytes in HX medium showed very low maturation rates and stayed at GV stage at the end of the 24 hour while control oocytes reached maximum maturation rates. LN group oocytes maturated like the control group until 8th hour but total maturation rate remained significantly low at the end of the experiment because of the high degeneration rates. Maturation didn't start at the HX+LN group for first six hour but reached the LN group at 24th hour. The increase of maturation rates at the HX+LN group with the effect of L-NAME after the sixth hour of the experiment which is zero before, showed that; intracellulary synthesized NO delays mouse oocyte maturation via inhibiting PDE3A with cGMP. Keywords : Oocyte maturation, Oocyte culture, Nitric Oxide (NO), Nitric Oxide Synthase (NOS), cyclic nucleotide phosphodiesterase (PDE).