Meme kanserinin erken evresinde tedavilerde gözlenen ilerlemelere karşın birçok kadında hastalık tekrar etmekte ve metastaz oluşmaktadır. Geleneksel tedavilerde başarı sınırlı olduğundan, kanser hastalarının çoğu komplementer ve alternetif tıptan köken alan tedavileri denemektedir. Ökse otu preperatları komplementer / alternatif kanser terapisinin en sık kullanılan formudur. Apoptozisi indüklemesi ve bu yolla hücrenin apoptotik ölümüne neden olması bakımından ökse otunun kanser tedavisinde önemi büyüktür. Standart kanser ilaçları ile kombine edilerek sitotoksik etkisinin araştırıldığı çalışmalarda ökse otunun sitotoksisitenin arttırılması yönünde kullanılabileceği belirtilerek ökse otu terapisi için yeni klinik bakış açısı önerilmektedir. Bu çalışmada, endemik ökse otunun alt türlerine ait tüm bitki ekstraktları Ökse-B, Ökse-Ç ve Ökse-K ekstraktlarının, MDA-MB-231 östrojen reseptörü negatif ve MCF-7 östrojen reseptörü pozitif olan iki farklı meme kanseri hücre hattı üzerine apoptotik etkisi araştırıldı. Bu etki, Almanya.da ticari olarak üretilen ve tedavi amacıyla kullanılan aynı alt türlere ait Helixor-A, Helixor-P ve Helixor-M ekstraktları.nın etkileri ile karşılaştırıldı. Ökse otu ekstraktlarının sitotoksik etkileri MTT ve ATP canlılık testleri ile belirlendi. MTT sonuçları ile mikroskobik inceleme sonuçları birbirinden farklı bulundu. MTT sonuçlarına göre endemik ökse otu ekstraktlarında ölüm olduğu halde pozitif interferanstan dolayı % canlılık daha fazla gözlendi. Ticari ökse otu ekstraktlarında tersi bir durum olarak ölüm olmamasına rağmen negatif interferanstan dolayı % canlılık çok düşük olarak bulundu. İnterferansın, bitki içeriğinin MTT metodu için kullanılan kimyasallarla etkileşiminden kaynaklanabileceği düşünülmektedir. Ökse otu ekstraktlarının, sitotoksik etkisini doğrulamak için ATP canlılık testi yapıldı. ATP canlılık metoduna göre, MDA-MB-231 hücre hattında endemik ökse otlarından Ökse-K.nın Ökse-B.ye oranla, ticari ökse otlarında ise Helixor-P.nin Helixor-A.ya oranla daha sitotoksik olduğu bulundu. MCF-7 hücre hattında ise endemik ökse otlarından Ökse-B.nin Ökse-K.ya oranla, ticari ökse otlarında ise Helixor-P.nin diğer iki ekstrakta oranla daha sitotoksik olduğu görüldü. MDA-MB-231 hücre hattı için tripan blue, ikili boyama ve hematoksilen boyama sonuçları ATP canlılık testi ile benzer sonuçları verirken, MCF-7 hücre hattında farklılık gözlendi. Her üç boyama sonucun da endemik ökse otlarından Ökse-K.nın sitotosik etkisinin, Ökse-B.den daha fazla olduğu görüldü. Hücre ölüm şeklinin belirlenmesinde ikili boyama ve hematoksilen boyama birlikte değerlendirildi. Hematoksilen boyamada, MDA-MB-231 ve MCF-7 hücre hatlarında, endemik ökse otu ekstraktlarından Ökse-K uygulananlarda ve ticari ökse otu ekstraktlarından Helixor-P uygulananlarda hücre membranlarının parçalandığı gözlendi. Bu durumun, uygulama süresinin uzun olmasından kaynaklandığına karar 87 verildi. İkili boyama sonuçları değerlendirildiğinde, Ökse-K uygulanan MDA-MB- 231 ve MCF-7 hücrelerinde propidium iyodür ile boyanan ölü hücre sayısı Helixor-P uygulananlara oranla daha fazla olduğu görüldü. Ancak ölümlerin nekrozdan mı yoksa sekonder nekrozdan mı kaynaklandığı bilinmemektedir. Endemik ve Ticari ökse otu ekstraktlarının MDA-MB-231 ve MCF-7 hücre hatlarında neden oldukları ölüm türlerinin araştırılması ve apoptozisin gösterilmesi amacıyla western blot yöntemi kullanılarak PARP (Poly-ADP-riboz polimeraz) proteininin aktivasyonu incelendi. Çalışma sonucunda, MDA hücre hatlarında yalnız Helixor-P uygulananlarda apoptotik ölüm gözlenirken, MCF hücre hatlarında Helixor-P ve 48 saat süreyle Ökse-K uygulananlarda apoptotik ölüm gözlendi. Endemik ökse otunun üç farklı alt türüne ait liyofilize ekstraktların, meme kanseri hücre hatları üzerine sitotoksik etkilerinin ticari ökse otu ekstraktlarıyla kıyaslanarak incelenmesinin literatürde önemli bir boşluğu dolduracağına inanmaktayız. Anahtar Kelimeler : Meme kanseri, Apoptozis, Ökse otu, Helixor.
Despite the advancements in the treatment of the early stage of breast cancer, disease repeats in many women and metastase occurs. Because of the limitations of the traditional treatments, most of the cancer patients try complementary or alternative treatments. Mistletoe preparates are the most common form of the complementary/alternative cancer therapy. In terms of inducing of apoptosis and by the way causing the apoptotic death of the cell, mistletoe is very important in the treatment of the cancer. In the researchs of cytotoxicity effects of mistletoe with the combination of standart cancer medicines, a new approach was suggested for the mistletoe treatment in the way of enhancement of the cytotoxicity. In this study, apoptotic effects of the whole extracts of the all sub-species of mistletoe; Mistletoe-B, Mistletoe-Ç and Mistletoe-K was researched on the two different breast cell lines: MDA-MB-231 ostrogen receptor negative and MCF-7 ostrogen receptor positive. This effect was matched with the extracts produced in Germany and used for treatment, Helixor-A, Helixor-P and Helixor-M extracts of the same sub-species. Cytotoxic effects of the mistletoe extracts was determined with MTT and ATP recurring tests. MTT results and microscobic examination results were different. According to MTT results, percent-liveliness was observed because of the positive interferrence despite the death in the mistletoe extracts. On the contrary that there is no death, percent-livelines was too low in the commercial extracts because of the negative interferrence. It is suggested that interferrence may be caused by the interaction with the chemicals used for MTT method. ATP liveliness test was done for the confirmation of the cytotoxic effects of the mistletoe extracts. To the ATP liveliness method, endemic mistletoes Mistletoe- K was more cytotoxic than Mistletoe-B and commercial mistletoes Helixor-P was more cytotoxic than Helixor-A in the MDA-MB-231 cell lines. In the MCF-7 cell lines endemic mistletoes Mistletoe-B was more cytotoxic than Mistletoe-K, commercial mistletoes Helixor-P was more cytotoxic than the other two extracts. Tripan blue, couple staining and hemotoxilen staining results was similar to the ATP liveliness test in the MDA-MB-231 cell lines but difference was observed in the MCF-7 cell lines. It was observed that Mistletoe-K was more cytotoxic than Mistletoe-B in the three staining results. Couple staining and hemotoxilen staining was used together to determine the death of the cell. In hemotoxilen staiting, it was observed that cell membranes was destroyed in MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines where applied endemic mistletoes Mistletoe-K and commercial mistletoes Helixor-P extracts. It was decided that this situation was derived from the long application time. When the results of the couple staining results evaluated, dead cell count stained with propidium was more in the mistletoe applied MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines than Helixor-P applied cell 89 lines. But its unknown whether the deaths resulted from necrosis or secondary necrosis. PARP (Poly-ADP riboz polymerase) protein activation was examined by western blot to Show apoptosis and investigation of the death types caused by endemic and commercial mistletoes in MDA-MB 231 and MCF-7 cell lines. In the study, in the MDA cell lines, apoptotic death was observed only in Helixor-P applied ones. In MCF cell lines, apoptotic cell death was observed in Helixor-P and 48-hoursMistletoe-K applied ones. We believe that cytotoxic examination of the lyophillised endemic extracts of 3 different mistletoe sub-species matched with commercial mistletoe extracts on the breast cell lines will fill the important space in the literatures. Keywords : Breast cancer, Apoptosis, Mistletoe, Helixor.
Tez (Doktora)- Süleyman Demirel Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı, 2011.
Kaynakça var.
Meme kanserinin erken evresinde tedavilerde gözlenen ilerlemelere karşın birçok kadında hastalık tekrar etmekte ve metastaz oluşmaktadır. Geleneksel tedavilerde başarı sınırlı olduğundan, kanser hastalarının çoğu komplementer ve alternetif tıptan köken alan tedavileri denemektedir. Ökse otu preperatları komplementer / alternatif kanser terapisinin en sık kullanılan formudur. Apoptozisi indüklemesi ve bu yolla hücrenin apoptotik ölümüne neden olması bakımından ökse otunun kanser tedavisinde önemi büyüktür. Standart kanser ilaçları ile kombine edilerek sitotoksik etkisinin araştırıldığı çalışmalarda ökse otunun sitotoksisitenin arttırılması yönünde kullanılabileceği belirtilerek ökse otu terapisi için yeni klinik bakış açısı önerilmektedir. Bu çalışmada, endemik ökse otunun alt türlerine ait tüm bitki ekstraktları Ökse-B, Ökse-Ç ve Ökse-K ekstraktlarının, MDA-MB-231 östrojen reseptörü negatif ve MCF-7 östrojen reseptörü pozitif olan iki farklı meme kanseri hücre hattı üzerine apoptotik etkisi araştırıldı. Bu etki, Almanya.da ticari olarak üretilen ve tedavi amacıyla kullanılan aynı alt türlere ait Helixor-A, Helixor-P ve Helixor-M ekstraktları.nın etkileri ile karşılaştırıldı. Ökse otu ekstraktlarının sitotoksik etkileri MTT ve ATP canlılık testleri ile belirlendi. MTT sonuçları ile mikroskobik inceleme sonuçları birbirinden farklı bulundu. MTT sonuçlarına göre endemik ökse otu ekstraktlarında ölüm olduğu halde pozitif interferanstan dolayı % canlılık daha fazla gözlendi. Ticari ökse otu ekstraktlarında tersi bir durum olarak ölüm olmamasına rağmen negatif interferanstan dolayı % canlılık çok düşük olarak bulundu. İnterferansın, bitki içeriğinin MTT metodu için kullanılan kimyasallarla etkileşiminden kaynaklanabileceği düşünülmektedir. Ökse otu ekstraktlarının, sitotoksik etkisini doğrulamak için ATP canlılık testi yapıldı. ATP canlılık metoduna göre, MDA-MB-231 hücre hattında endemik ökse otlarından Ökse-K.nın Ökse-B.ye oranla, ticari ökse otlarında ise Helixor-P.nin Helixor-A.ya oranla daha sitotoksik olduğu bulundu. MCF-7 hücre hattında ise endemik ökse otlarından Ökse-B.nin Ökse-K.ya oranla, ticari ökse otlarında ise Helixor-P.nin diğer iki ekstrakta oranla daha sitotoksik olduğu görüldü. MDA-MB-231 hücre hattı için tripan blue, ikili boyama ve hematoksilen boyama sonuçları ATP canlılık testi ile benzer sonuçları verirken, MCF-7 hücre hattında farklılık gözlendi. Her üç boyama sonucun da endemik ökse otlarından Ökse-K.nın sitotosik etkisinin, Ökse-B.den daha fazla olduğu görüldü. Hücre ölüm şeklinin belirlenmesinde ikili boyama ve hematoksilen boyama birlikte değerlendirildi. Hematoksilen boyamada, MDA-MB-231 ve MCF-7 hücre hatlarında, endemik ökse otu ekstraktlarından Ökse-K uygulananlarda ve ticari ökse otu ekstraktlarından Helixor-P uygulananlarda hücre membranlarının parçalandığı gözlendi. Bu durumun, uygulama süresinin uzun olmasından kaynaklandığına karar 87 verildi. İkili boyama sonuçları değerlendirildiğinde, Ökse-K uygulanan MDA-MB- 231 ve MCF-7 hücrelerinde propidium iyodür ile boyanan ölü hücre sayısı Helixor-P uygulananlara oranla daha fazla olduğu görüldü. Ancak ölümlerin nekrozdan mı yoksa sekonder nekrozdan mı kaynaklandığı bilinmemektedir. Endemik ve Ticari ökse otu ekstraktlarının MDA-MB-231 ve MCF-7 hücre hatlarında neden oldukları ölüm türlerinin araştırılması ve apoptozisin gösterilmesi amacıyla western blot yöntemi kullanılarak PARP (Poly-ADP-riboz polimeraz) proteininin aktivasyonu incelendi. Çalışma sonucunda, MDA hücre hatlarında yalnız Helixor-P uygulananlarda apoptotik ölüm gözlenirken, MCF hücre hatlarında Helixor-P ve 48 saat süreyle Ökse-K uygulananlarda apoptotik ölüm gözlendi. Endemik ökse otunun üç farklı alt türüne ait liyofilize ekstraktların, meme kanseri hücre hatları üzerine sitotoksik etkilerinin ticari ökse otu ekstraktlarıyla kıyaslanarak incelenmesinin literatürde önemli bir boşluğu dolduracağına inanmaktayız. Anahtar Kelimeler : Meme kanseri, Apoptozis, Ökse otu, Helixor.
Despite the advancements in the treatment of the early stage of breast cancer, disease repeats in many women and metastase occurs. Because of the limitations of the traditional treatments, most of the cancer patients try complementary or alternative treatments. Mistletoe preparates are the most common form of the complementary/alternative cancer therapy. In terms of inducing of apoptosis and by the way causing the apoptotic death of the cell, mistletoe is very important in the treatment of the cancer. In the researchs of cytotoxicity effects of mistletoe with the combination of standart cancer medicines, a new approach was suggested for the mistletoe treatment in the way of enhancement of the cytotoxicity. In this study, apoptotic effects of the whole extracts of the all sub-species of mistletoe; Mistletoe-B, Mistletoe-Ç and Mistletoe-K was researched on the two different breast cell lines: MDA-MB-231 ostrogen receptor negative and MCF-7 ostrogen receptor positive. This effect was matched with the extracts produced in Germany and used for treatment, Helixor-A, Helixor-P and Helixor-M extracts of the same sub-species. Cytotoxic effects of the mistletoe extracts was determined with MTT and ATP recurring tests. MTT results and microscobic examination results were different. According to MTT results, percent-liveliness was observed because of the positive interferrence despite the death in the mistletoe extracts. On the contrary that there is no death, percent-livelines was too low in the commercial extracts because of the negative interferrence. It is suggested that interferrence may be caused by the interaction with the chemicals used for MTT method. ATP liveliness test was done for the confirmation of the cytotoxic effects of the mistletoe extracts. To the ATP liveliness method, endemic mistletoes Mistletoe- K was more cytotoxic than Mistletoe-B and commercial mistletoes Helixor-P was more cytotoxic than Helixor-A in the MDA-MB-231 cell lines. In the MCF-7 cell lines endemic mistletoes Mistletoe-B was more cytotoxic than Mistletoe-K, commercial mistletoes Helixor-P was more cytotoxic than the other two extracts. Tripan blue, couple staining and hemotoxilen staining results was similar to the ATP liveliness test in the MDA-MB-231 cell lines but difference was observed in the MCF-7 cell lines. It was observed that Mistletoe-K was more cytotoxic than Mistletoe-B in the three staining results. Couple staining and hemotoxilen staining was used together to determine the death of the cell. In hemotoxilen staiting, it was observed that cell membranes was destroyed in MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines where applied endemic mistletoes Mistletoe-K and commercial mistletoes Helixor-P extracts. It was decided that this situation was derived from the long application time. When the results of the couple staining results evaluated, dead cell count stained with propidium was more in the mistletoe applied MDA-MB-231 and MCF-7 cell lines than Helixor-P applied cell 89 lines. But its unknown whether the deaths resulted from necrosis or secondary necrosis. PARP (Poly-ADP riboz polymerase) protein activation was examined by western blot to Show apoptosis and investigation of the death types caused by endemic and commercial mistletoes in MDA-MB 231 and MCF-7 cell lines. In the study, in the MDA cell lines, apoptotic death was observed only in Helixor-P applied ones. In MCF cell lines, apoptotic cell death was observed in Helixor-P and 48-hoursMistletoe-K applied ones. We believe that cytotoxic examination of the lyophillised endemic extracts of 3 different mistletoe sub-species matched with commercial mistletoe extracts on the breast cell lines will fill the important space in the literatures. Keywords : Breast cancer, Apoptosis, Mistletoe, Helixor.