Özet: Bu çalışmada, Süleyman Demirel Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesi Yoğun Bakım Servisi hastalarından izole edilmiş 100 adet P. aeruginosa klinik izolatı kullanılmıştır. Bu izolatlar, Chromobacterium violaceum CV026 ve Agrobacterium tumefaciens NT1 indikatör suşları kullanılarak, AHL sinyal moleküllerinin üretimleri açısından test edilmiştir. C. violaceum CV026 susu kullanılarak yapılan testlerde yirmi adet izolatın BHL sinyal molekülünü üretemediği tespit edilmiştir. İnce Tabaka Kromatografisi kullanılarak BHL sinyal molekülünün bu izolatlarda bulunmadığı doğrulanmıştır. Bu izolatlar proteaz, ramnolipid, piyosiyanin, elastaz, lasA gibi virülens faktörleri ayrıca; yüzme, titreme ve kayma hareketleri gibi kontrolü çevreyi algılama sistemi tarafından gerçekleştirilen özellikler bakımından analiz edilmiştir. Bu izolatlar çevreyi algılama sistemi lasR, lasI, rhlR ve rhlI genlerinin varlığı açısından analiz edilmiştir. Sonuçta dört adet klinik izolat rhlR ve rhlI genleri için dizi analizi yaptırılmıştır. Ve dört susun ikisinde rhlR ve rhlI genlerinde, diğer iki susta ise sadece rhlI geninde mutasyon tespit edilmiştir. Bu mutasyonlar daha önce rapor edilmemiştir. Bu mutasyonlar izolatlarda, BHL sinyal molekülü üretimindeki bozukluğun yanı sıra virülens faktörlerinin üretilmesindeki bozuklukları da açıklamaktadır. Bu klinik P. aeruginosa izolatları çevreyi algılama sistemlerinde bozukluk bulunmasına rağmen, farklı enfeksiyonları oluşturabilmektedir. Anahtar kelimeler: P. aeruginosa, Çevreyi Algılama, N-Açil- Homoserin lakton.
Abstract: Hundred P. aeruginosa strains isolated from Intensive Care Units at Süleyman Demirel University Hospital were used in this study. These isolates were tested for production of AHLs using indicator strains the Chromobacterium violaceum strain CV026 and the Agrobacterium tumefaciens strain NT1. Twenty isolates had no BHL activity by using bioassay strain C. violaceum CV026. We confirmed BHL production deficiency in these isolates by using thin-layer chromatography (TLC). These isolates were analysed for the production of several virulence factors such as protease, rhamnolipids, pyocyanine, elastase, LasA and swimming, twitching, and swarming, motility controlled via N-acylhomoserine lactone (AHL)-mediated quorum sensing. These isolates were also analysed for presence of quorum sensing genes lasR, lasI, rhlR and rhlI. Analysis of the sequences of the rhlR and rhlI genes of these four isolates showed that two of the four isolates had mutational defects in both rhlR and rhlI genes and other two were only mutated in the rhlI gene. These mutations were not reported previously. Mutations in these isolates could explain virulence factor negative phenotype, as well as their deficiency in BHL production. Although these isolates have deficient QS systems, they are capable of causing infections. Keywords: P. aeruginosa, Quorum sensing, N-Acyl-Homoserine lactone.
Tez (Doktora) - Süleyman Demirel Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji Anabilim Dalı, 2007.
Kaynakça var.
Özet: Bu çalışmada, Süleyman Demirel Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesi Yoğun Bakım Servisi hastalarından izole edilmiş 100 adet P. aeruginosa klinik izolatı kullanılmıştır. Bu izolatlar, Chromobacterium violaceum CV026 ve Agrobacterium tumefaciens NT1 indikatör suşları kullanılarak, AHL sinyal moleküllerinin üretimleri açısından test edilmiştir. C. violaceum CV026 susu kullanılarak yapılan testlerde yirmi adet izolatın BHL sinyal molekülünü üretemediği tespit edilmiştir. İnce Tabaka Kromatografisi kullanılarak BHL sinyal molekülünün bu izolatlarda bulunmadığı doğrulanmıştır. Bu izolatlar proteaz, ramnolipid, piyosiyanin, elastaz, lasA gibi virülens faktörleri ayrıca; yüzme, titreme ve kayma hareketleri gibi kontrolü çevreyi algılama sistemi tarafından gerçekleştirilen özellikler bakımından analiz edilmiştir. Bu izolatlar çevreyi algılama sistemi lasR, lasI, rhlR ve rhlI genlerinin varlığı açısından analiz edilmiştir. Sonuçta dört adet klinik izolat rhlR ve rhlI genleri için dizi analizi yaptırılmıştır. Ve dört susun ikisinde rhlR ve rhlI genlerinde, diğer iki susta ise sadece rhlI geninde mutasyon tespit edilmiştir. Bu mutasyonlar daha önce rapor edilmemiştir. Bu mutasyonlar izolatlarda, BHL sinyal molekülü üretimindeki bozukluğun yanı sıra virülens faktörlerinin üretilmesindeki bozuklukları da açıklamaktadır. Bu klinik P. aeruginosa izolatları çevreyi algılama sistemlerinde bozukluk bulunmasına rağmen, farklı enfeksiyonları oluşturabilmektedir. Anahtar kelimeler: P. aeruginosa, Çevreyi Algılama, N-Açil- Homoserin lakton.
Abstract: Hundred P. aeruginosa strains isolated from Intensive Care Units at Süleyman Demirel University Hospital were used in this study. These isolates were tested for production of AHLs using indicator strains the Chromobacterium violaceum strain CV026 and the Agrobacterium tumefaciens strain NT1. Twenty isolates had no BHL activity by using bioassay strain C. violaceum CV026. We confirmed BHL production deficiency in these isolates by using thin-layer chromatography (TLC). These isolates were analysed for the production of several virulence factors such as protease, rhamnolipids, pyocyanine, elastase, LasA and swimming, twitching, and swarming, motility controlled via N-acylhomoserine lactone (AHL)-mediated quorum sensing. These isolates were also analysed for presence of quorum sensing genes lasR, lasI, rhlR and rhlI. Analysis of the sequences of the rhlR and rhlI genes of these four isolates showed that two of the four isolates had mutational defects in both rhlR and rhlI genes and other two were only mutated in the rhlI gene. These mutations were not reported previously. Mutations in these isolates could explain virulence factor negative phenotype, as well as their deficiency in BHL production. Although these isolates have deficient QS systems, they are capable of causing infections. Keywords: P. aeruginosa, Quorum sensing, N-Acyl-Homoserine lactone.