Bu tez çalışmasında yerel Aspergillus fumigatus HBF356'dan endoglukanaz enzimi, amonyum sülfat çöktümesi, jel filtrasyon kromatografsi ve iyon değişim kromatografisi kullanılarak saflaştırılmıştır. Saf olarak elde edilen enzime ait molekül ağırlığı 95 kDa olarak belirlenmiştir. Elde edilen enzimin optimum pH'sı 4.0 ve optimum sıcaklığı 60 °C olarak belirlenmiştir. Enzimin oldukça yüksek termostabiliteye sahip olduğu ve 50 °C'de 240 saat inkübasyon sonunda aktivitesinin %75,8'ini koruduğu görülmüştür. Aynı zamanda enzimin aktivitesi üzerine veteriner ilaçlarının aktivitesi araştırılmış ve gentamisin sülfat ile enzimin inhibe olduğu enroflaksasin ile aktivite olduğu belirlenmiştir. Bu enzimin yem katkısı olarak kullanımında hayvan ilaçları ile nasıl etkileşeceği hakkında bilgi sağlanmıştır. Aspergillus fumigatus Strain HBF 356'ten Enzimlerin saflaştırılması ve karakterizasyonu endüstri alanında farklı kullanımları açısından önemlidir. Anahtar Kelimeler: Endoglukanaz, saflaştırma, karakterizasyon, metal iyonları, sürfaktanlar, kinetik çalışma.
In this thesis, endoglucanase enzyme from native Aspergillus fumigatus HBF356 was purified using ammonium sulphate precipitation, gel filtration chromatography and ion exchange chromatography. The molecular weight of the pure enzyme was determined as 95 kDa. The optimum pH of the obtained enzyme was determined as 4.0 and the optimum temperature as 60 ° C. It has been observed that the enzyme has a very high thermostability and preserves 75.8% of its activity after 240 hours of incubation at 50 ° C. It was determined using SDS-PAGE. A 12% T release gel and 5% T loading gel were prepared. After the sample was loaded, electrophoresis was carried out at 150 volts for 2 hours at room temperature. Protein bands were made visible by Coomassie staining. At the same time, the activity of veterinary drugs on the activity of the enzyme was investigated and it was determined that the enzyme was inhibited by gentamicin sulfate and the activity with enroflaxacin. Information has been provided on how this enzyme interacts with animal drugs in its use as a feed additive. Purification and characterization of Aspergillus fumigatus Strain from HBF356 is important for its different uses in the industry. Keywords: Endoglucanase, purification, characterization, metal salts, surfactants, kinetic study.
Tez (Yüksek Lisans) - Süleyman Demirel Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, 2021.
Kaynakça var.
Bu tez çalışmasında yerel Aspergillus fumigatus HBF356'dan endoglukanaz enzimi, amonyum sülfat çöktümesi, jel filtrasyon kromatografsi ve iyon değişim kromatografisi kullanılarak saflaştırılmıştır. Saf olarak elde edilen enzime ait molekül ağırlığı 95 kDa olarak belirlenmiştir. Elde edilen enzimin optimum pH'sı 4.0 ve optimum sıcaklığı 60 °C olarak belirlenmiştir. Enzimin oldukça yüksek termostabiliteye sahip olduğu ve 50 °C'de 240 saat inkübasyon sonunda aktivitesinin %75,8'ini koruduğu görülmüştür. Aynı zamanda enzimin aktivitesi üzerine veteriner ilaçlarının aktivitesi araştırılmış ve gentamisin sülfat ile enzimin inhibe olduğu enroflaksasin ile aktivite olduğu belirlenmiştir. Bu enzimin yem katkısı olarak kullanımında hayvan ilaçları ile nasıl etkileşeceği hakkında bilgi sağlanmıştır. Aspergillus fumigatus Strain HBF 356'ten Enzimlerin saflaştırılması ve karakterizasyonu endüstri alanında farklı kullanımları açısından önemlidir. Anahtar Kelimeler: Endoglukanaz, saflaştırma, karakterizasyon, metal iyonları, sürfaktanlar, kinetik çalışma.
In this thesis, endoglucanase enzyme from native Aspergillus fumigatus HBF356 was purified using ammonium sulphate precipitation, gel filtration chromatography and ion exchange chromatography. The molecular weight of the pure enzyme was determined as 95 kDa. The optimum pH of the obtained enzyme was determined as 4.0 and the optimum temperature as 60 ° C. It has been observed that the enzyme has a very high thermostability and preserves 75.8% of its activity after 240 hours of incubation at 50 ° C. It was determined using SDS-PAGE. A 12% T release gel and 5% T loading gel were prepared. After the sample was loaded, electrophoresis was carried out at 150 volts for 2 hours at room temperature. Protein bands were made visible by Coomassie staining. At the same time, the activity of veterinary drugs on the activity of the enzyme was investigated and it was determined that the enzyme was inhibited by gentamicin sulfate and the activity with enroflaxacin. Information has been provided on how this enzyme interacts with animal drugs in its use as a feed additive. Purification and characterization of Aspergillus fumigatus Strain from HBF356 is important for its different uses in the industry. Keywords: Endoglucanase, purification, characterization, metal salts, surfactants, kinetic study.