Buçalışmada, TiO2 nanopartiküllerhazırlandı ve 3-(3,4-dihidroksifenil) propiyonik asit ile –COOHfonksiyonelleştirildi. FTIR, TEM, EDS ve XRD ile nanopartiküllerinkarakterizasyonu gerçekleştirildi. HRP elde edilen nanopartiküllerin üzerineEDC/NHS bağlama yolu ile immobilize edildi. A: enzim konsantrasyonu (0.5-1.5mg/mL), B: immobilizasyon pH’sı (4.0-8.0), C: immobilizasyon sıcaklığı(4-50°C), D: immobilizasyon süresi (1-20 h)’ni içeren HRP’nin immobilizasyonkoşulları yanıt yüzey yöntemi ve Box-Behnken dizayn kullanılarak optimizeedildi. Optimize edilen immobilizasyon koşulları, immobilize HRP aktivitesiiçin 0.5 mg/mL HRP, pH 5.5, 40 °C ve 8 saat, protein bağlama verimi (%) için1.5 mg/mL HRP, pH 4, 18°C ve 20 saat olarak belirlendi. Bu immobilizasyonkoşullarında immobilize HRP için elde edilen deneysel değer 80.39 U ± 1.06iken, protein bağlama verimi 94.25 ± 3.58%’dir. Bunun dışında serbest veimmobilize enzimin optimum sıcaklık ve pH değeri sırasıyla 50°C ve 4.0; 50°C ve3.5 olarak belirlendi. 4°C’de 10 gün saklama sonunda immobilize HRP’ninbaşlangıç aktivitesinin %52’si kalmıştır. Ayrıca immobilize HRP 6 kez arkaarakaya kullanım sonucunda başlangıç aktivitesinin %48’ini sürdürmüştür. In thisstudy, TiO2 nanoparticles were prepared and -COOH functionalizedwith 3-(3,4-dihydroxyphenyl) propionic acid. The characterization ofnanoparticles was performed by FTIR, TEM, EDS and XRD. HRP was immobilized onthose nanoparticles by EDC/NHS coupling reaction. The immobilization conditionsof HRP including A: enzyme concentration (0.5-1.5 mg/mL), B: immobilization pH(4.0-8.0), C: immobilization temperature (4-50°C), D: immobilization time (1-20h) were optimized by response surface methodology and Box-Behnken design. Theoptimized immobilization conditions were identified as 0.5 mg/mL HRP, at pH5.5, 40 °C for 8 h for activity of immobilized HRP, 1.5 mg/mL HRP, at pH 4 and18°C for 20 h for protein binding yield (%). At these optimum conditions, the experimentalvalue for the activity of immobilized HRP was 80.39 U ± 1.06; protein bindingyield was 94.25 ± 3.58%. Moreover, the optimum temperature and pH of free andimmobilized enzyme were determined as 50°C and 4.0; 50°C and 3.5, respectively.The activity of the immobilized HRP sustained 52% of its initial activity after10 days storage at 4°C. Furthermore,the immobilized HRP sustained 48% of its initial activity after 6 consecutivereactions.